De muitas coisas que você ouviu sobre a COVID-19 em 2020, uma coisa no meio de tudo isso é o teste usado para detectar se alguém está contaminado com o vírus, o famoso teste RT-PCR ou apenas PCR.
Certamente, você já ouviu falar deste teste antes, de um profissional médico ou no noticiário. O teste PCR é empregado para detectar a presença (ou não) do vírus no corpo de alguém.
O teste RT-PCR não é o único que pode detectar o vírus, mas é, em comparação com os outros métodos, o mais preciso e confiável. Outro teste é o teste sorológico convencional que detecta níveis específicos de anticorpos em amostras de sangue.
As cartas em RT-PCR, significam Transcrição reversa da reação em cadeia da polimeraseA tecnologia é utilizada há décadas pelos cientistas para produzir múltiplas cópias de material genético.
Em outras palavras, neste caso, mais material genético do SRA-CoV-2, que são usados como impressão digital para atestar a presença do vírus em amostras do nariz, orelhas ou saliva coletadas dos pacientes. Se houver algum vírus escondido na amostra, mesmo em pequenas quantidades, ele será capaz de detectar por causa de seu ciclo de copiar-colar. É por isso que o teste RT-PCR é tão confiável.
O teste é um método com basicamente duas etapas dentro do ciclo de temperatura, que faz um processo de copiar-colar de um pedaço de material genético, sejam DNAs ou RNAs.
O teste requer um máquina de termociclagem que tem um controle de temperatura e tempo. Através de múltiplos ciclos de temperatura, o material genético viral aumentará. Um exemplo de um ciclo de temperatura é mostrado a seguir.
O método requer duas enzimas principais, a Transcriptase Reversa (por isso o "RT" no título) e a DNA-polimerase. Cada uma delas tem uma fase de ação e uma função. Na figura acima, a fase amarela do ciclo é quando o RT age, e a fase vermelha é quando a DNA-polimerase faz seu trabalho.
A primeira enzima faz a fita de DNA complementar do vírus RNA, permitindo que a segunda enzima realize o trabalho de copy-paste da nova fita de DNA, aumentando a quantidade de material genético presente. Esta amplificação torna possível caracterizar e/ou manipular o material genético, quando em uma quantidade menor não seria possível.
Para todo este processo, as enzimas precisam da ajuda de uma molécula pequena (ou grande) chamada PRIMER. A função do primer é indicar o local onde a enzima deve começar a estender os fios, sem ele o processo de copiar-polar da DNA-polimerase não começará.
A cartilha pode ser escolhida com uma forma aleatória ou específica. É muito importante conhecer o mapa genético do vírus em casos como este, para que primes específicos possam ser usados para aumentar a eficiência e a confiabilidade dos resultados.
Se você está curioso como nós e gostaria de saber mais detalhes sobre o RT-PCR, você pode verificar mais detalhes este artigo científico aqui mesmo mas em essência aqui está tudo o que é necessário para fazer o teste:
Material genético viral, o RNA
Transcriptase reversa e enzimas DNA-polimerase
PRIMERS
Trifosfatos nucleósidos
E Corantes Repórteres Fluorescentes:
Para conhecer os resultados de uma amostra que pode ou não estar contaminada com o vírus COVID-19, o ensaio de corantes fluorescentes de repórter é usado em combinação com o teste RT-PCR. O ensaio é baseado na presença ou não de um sinal fluorescente de uma amostra. Na ausência de um sinal, o teste pode ser concluído como negativo ou falso-negativo. Na presença de um sinal intenso, pode ser concluído não apenas positivo para a presença de vírus, mas também como uma doença em estágio avançado.
Misture todos os ingredientes e coloque-os na máquina de termociclo.
A primeira etapa do teste é mostrada no infográfico a seguir. A enzima RT faz a primeira cópia do material genético do vírus presente na amostra. A seguir, você vê a segunda etapa do método RT-PCR. O primer indica a posição inicial e a DNA-polimerase através da reação enzimática começa a estender os fios de DNA.
Finalmente, esta imagem é uma imagem de micrografia eletrônica do vírus SARS-CoV-2, e é possível ver perfeitamente a estrutura do vírus. Não é lindo?
O teste é complexo e não é tão simples quanto parece, mas aposto que com os infográficos foi muito mais fácil entender o grande quadro de como ele funciona, certo?
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Referência
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