Boyalar\u0131n, antikorlar\u0131n ve floresan problar\u0131n kullan\u0131m\u0131, bilim insanlar\u0131n\u0131n mikroskop h\u00fccrelerinde, aksi takdirde g\u00f6r\u00fclemeyecek ve hatta anla\u015f\u0131lamayacak kadar k\u00fc\u00e7\u00fck olan g\u00f6r\u00fcnt\u00fcleri g\u00f6rmelerini sa\u011flar.<\/p>\n\n\n\n
Floresan mikroskoplar<\/strong> ve florokromlar\u0131n kullan\u0131m\u0131 1930'da m\u00fcmk\u00fcn oldu1<\/sup><\/a>ve g\u00fcn\u00fcm\u00fczde proteinleri, organelleri ve h\u00fccre ve dokulardaki yap\u0131lar\u0131 boyamak i\u00e7in bir\u00e7ok florokrom kombinasyonu m\u00fcmk\u00fcnd\u00fcr.<\/p>\n\n\n\n Florokromlar (veya floroforlar)<\/strong> belirli bir dalga boyunda \u0131\u015f\u0131kla uyar\u0131ld\u0131\u011f\u0131nda, mikroskop mercekleri taraf\u0131ndan yakalanacak ve ger\u00e7ek bir g\u00f6r\u00fcnt\u00fcye d\u00f6n\u00fc\u015ft\u00fcr\u00fclecek olan tan\u0131mlanm\u0131\u015f bir dalga boyunda \u0131\u015f\u0131k yayan molek\u00fcllerdir.<\/p>\n\n\n\n Floresan, lensler ve kameralar\u0131n kombinasyonu, h\u00fccrelerin i\u00e7indeki s\u00fcre\u00e7lerin bir\u00e7ok farkl\u0131 g\u00f6r\u00fcn\u00fcm ve a\u00e7\u0131dan g\u00f6r\u00fcnt\u00fcs\u00fcn\u00fc almam\u0131z\u0131 sa\u011flar.<\/p>\n\n\n\n \u00d6rne\u011fin, mikroskobu kullanarak, 2,5x veya 4x objektifte bir fare beyin diliminin daha geni\u015f bir g\u00f6r\u00fcnt\u00fcs\u00fcne ve 63x objektif kullanarak ayn\u0131 \u00f6rnekte problanan aktin h\u00fccre iskeletinin k\u00fc\u00e7\u00fck ayr\u0131nt\u0131lar\u0131na sahibiz.<\/p>\n\n\n\n Bu analizleri m\u00fcmk\u00fcn k\u0131lmak i\u00e7in, h\u00fccre veya dokuda bulunan spesifik proteinlere kar\u015f\u0131 antikorlar veya boyalar kullanabiliriz ve antikor genellikle bir florofor ile birlikte gelir.<\/p>\n\n\n\n Stokes kaymas\u0131 bu fenomeni a\u00e7\u0131klar: floroforlar uyar\u0131lm\u0131\u015f bir durumdan temel duruma geri d\u00f6nd\u00fcklerinde yay\u0131lan \u0131\u015f\u0131k \u015feklinde titre\u015fimsel enerji kaybederler. Floresan mikroskoplar\u0131 floroforu uyarmak i\u00e7in \u0131\u015f\u0131k sa\u011flar ve yay\u0131lan \u0131\u015f\u0131\u011f\u0131 al\u0131r. Yay\u0131lan \u0131\u015f\u0131k bir lens taraf\u0131ndan yakalanabilir, bir CCD kamera i\u00e7inde i\u015flenebilir ve dijital bir g\u00f6r\u00fcnt\u00fcye d\u00f6n\u00fc\u015ft\u00fcr\u00fclebilir.<\/p>\n\n\n\n Ancak h\u00fccre g\u00f6r\u00fcnt\u00fcs\u00fc alma konusunu daha sonra konu\u015fal\u0131m. \u015eimdi, g\u00f6r\u00fcnt\u00fcn\u00fcz\u00fc almadan \u00f6nceki ana ad\u0131mlar i\u00e7in size \u00f6rnekler ve ipu\u00e7lar\u0131 sunmal\u0131y\u0131z.<\/p>\n\n\n\n H\u00fccreler veya dokular i\u00e7indeki organeller ve proteinler aras\u0131ndaki ili\u015fkileri g\u00f6rmek ve anlamak i\u00e7in farkl\u0131 boya ve antikor t\u00fcrlerini nas\u0131l se\u00e7er ve birle\u015ftiririz?<\/p>\n\n\n\n \u00d6ncelikle, bilim insanlar\u0131n\u0131n ara\u015ft\u0131rmalar\u0131na dayanarak hangi antikorlar\u0131 ve boyalar\u0131 kullanacaklar\u0131n\u0131 belirlemeleri gerekir.<\/p>\n\n\n\n \u00d6rne\u011fin, bu makalede<\/a>Mendon\u00e7a, katyonik kat\u0131 lipid nanopartik\u00fcllerin (cSLN'ler) s\u0131\u00e7anlardaki etkilerini ve potansiyel risklerini de\u011ferlendirmeye \u00e7al\u0131\u015f\u0131yordu. Her y\u0131l bir\u00e7ok hastal\u0131\u011f\u0131n tedavisi i\u00e7in ila\u00e7lar\u0131n veya genlerin iletimini art\u0131rmay\u0131 ama\u00e7layan bir\u00e7ok nanopartik\u00fcl geli\u015ftirilmekte ve \u00fczerinde \u00e7al\u0131\u015f\u0131lmaktad\u0131r. Bu \u00e7al\u0131\u015fmadaki ilgin\u00e7 sorulardan biri, nanopartik\u00fcllerin kan-beyin bariyerini ge\u00e7erek beyne ula\u015f\u0131p ula\u015famayaca\u011f\u0131yd\u0131. Bu bariyer beynimizi dola\u015f\u0131mdaki toksinlerden veya patojenlerden korur ve genellikle molek\u00fcllerin bariyeri ge\u00e7mesi istenmez. Ancak bu \u00f6zel durumda, Mendon\u00e7a'n\u0131n<\/a> Ama\u00e7, nanopartik\u00fcllerin bariyeri ge\u00e7erek beyne ula\u015fmas\u0131 ve gelecekteki bir uygulamada ila\u00e7 veya genleri iletmesiydi.<\/p>\n\n\n\n Nanopartik\u00fcllerin beyin parankiminde mevcut olup olmad\u0131\u011f\u0131n\u0131 g\u00f6rmek isteyen yazarlar, damarlar i\u00e7in RECA-1 (k\u0131rm\u0131z\u0131 ile temsil edilir) ad\u0131 verilen bir endotel h\u00fccre i\u015faretleyicisi kullan\u0131rken, h\u00fccre \u00e7ekirdekleri DAPI (4\u2032,6-diamidino-2-fenilindol) ad\u0131 verilen mavi bir boya ile boyand\u0131. Damarlar\u0131n d\u0131\u015f\u0131ndaki nanopartik\u00fcller i\u00e7in k\u00fc\u00e7\u00fck ye\u015fil noktalar da g\u00f6zlemleyebiliyoruz, bu da beyin parankimine ula\u015ft\u0131klar\u0131 anlam\u0131na geliyor.<\/p>\n\n\n\n Temsili bir g\u00f6r\u00fcnt\u00fc ile a\u015fa\u011f\u0131daki bilgi grafi\u011fine g\u00f6z at\u0131n.<\/p>\n\n\n RECA-1 (k\u0131rm\u0131z\u0131) antikorunun ne yapt\u0131\u011f\u0131n\u0131 anlayal\u0131m.<\/p>\n\n\n\n Bu antikorlar spesifik problar olarak tasarlanm\u0131\u015ft\u0131r ve spesifik bir antijeni hedef al\u0131rlar (bizim durumumuzda RECA-1 proteini).<\/p>\n\n\n\n Bunlar bir florofor ile etiketlenebilir veya daha sonra bir florofora ba\u011fl\u0131 ikincil bir antikor taraf\u0131ndan tan\u0131nabilir.<\/p>\n\n\n\n Bu nedenle, numune bir \u0131\u015f\u0131k kayna\u011f\u0131 ile uyar\u0131ld\u0131ktan sonra, Arad\u0131\u011f\u0131n\u0131z spesifik protein, numunenizde belirli bir dalga boyunda \u0131\u015f\u0131k emisyonu ile tan\u0131nacakt\u0131r<\/a>.<\/p>\n\n\n\n DAPI durumunda, bu boya \u00e7ekirdek ve n\u00fckleozom kar\u015f\u0131 boyas\u0131d\u0131r ve DNA'n\u0131n AT b\u00f6lgelerine ba\u011fland\u0131\u011f\u0131nda mavi floresan yayar.<\/p>\n\n\n\n \u0130mm\u00fcnofloresan i\u00e7in bir panel nas\u0131l tasarlan\u0131r? <\/strong><\/p>\n\n\n\n Bu ad\u0131mlarla ba\u015flay\u0131n:<\/strong><\/p>\n\n\n\n Son olarak, n\u00fckleik asitler i\u00e7in Hoechst 33258 ve ikincil antikor Alexa Fluor 647 ile etiketlenmi\u015f RECA-1'e kar\u015f\u0131 bir birincil antikora sahip oldu\u011fumuz varsay\u0131msal bir deney i\u00e7in bir \u00f6rne\u011fi kontrol edin.<\/p>\n\n\n\n \u0130deal olarak, bir DAPI k\u00fcp\u00fc (eksitasyon 377\/50 ve emisyon 447\/60) ve bir CY5 k\u00fcp\u00fc (eksitasyon 628\/40 ve emisyon 685\/40) bulunan bir mikroskop kullan\u0131rd\u0131k. Ekledi\u011fimiz t\u00fcm bu bilgiler Floresan Spektrum G\u00f6r\u00fcnt\u00fcleyici<\/a> ve her iki boya i\u00e7in spektrumlar\u0131 ve her iki k\u00fcp i\u00e7in bant geni\u015fliklerini elde etti (yukar\u0131daki infografikte spektruma g\u00f6z at\u0131n).<\/p>\n\n\n\n Bu varsay\u0131msal makale, floroforlar\u0131n spektrumlar\u0131n\u0131n uyarma ve emisyon filtrelerinin i\u00e7ine ait oldu\u011fu ve ara\u015ft\u0131rmac\u0131n\u0131n \u00f6rneklerini m\u00fcmk\u00fcn olan en iyi \u015fekilde yakalamas\u0131n\u0131 m\u00fcmk\u00fcn k\u0131lan iyi bir \u00f6rnektir.<\/p>\n\n\n\n \u015eimdi, laboratuvara gitme ve her \u015feyi uygulamaya koyma zaman\u0131!<\/p>\n\n\n\n Umar\u0131m bu ipu\u00e7lar\u0131 bir sonraki laboratuvar deneyinizde size yard\u0131mc\u0131 olur. \u0130yi \u015fanslar!<\/p>\n\n\n\n Referanslar:<\/strong><\/p>\n\n\n\n Bilim insan\u0131n\u0131n rutininin b\u00fcy\u00fck bir k\u0131sm\u0131 deney tasarlamak ve ger\u00e7ekle\u015ftirmektir. Laboratuvar tekniklerinin kombinasyonu, bilim insanlar\u0131 taraf\u0131ndan \u00f6nerilen sorular\u0131n \u00e7o\u011funa cevap verecektir ve yeni y\u00f6ntemler \u00f6nermek i\u00e7in i\u015f ak\u0131\u015f\u0131 bilim insan\u0131n\u0131n ge\u00e7mi\u015fine ve deneyimine ba\u011fl\u0131d\u0131r. Biyologlar i\u00e7in h\u00fccre g\u00f6r\u00fcnt\u00fcleri, h\u00fccrede neler olup bitti\u011fi hakk\u0131nda \u00e7ok \u015fey s\u00f6yleyebilir [...]<\/p>","protected":false},"author":18,"featured_media":12982,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":[],"categories":[66,959,958,28,38],"tags":[51,554,962],"yoast_head":"\n![\"Mind](\"https:\/\/mindthegraph.com\/blog\/wp-content\/uploads\/2021\/06\/preview-347880-7-788x1024.png\")
<\/a><\/figure><\/div>\n\n\n\n
\n