The use of dyes, antibodies, and fluorescent probes allows scientists to see in the microscope cells images of what was otherwise too small to be seen and even comprehended.<\/p>\n\n\n\n
Fluorescensmikroskoper<\/strong> og bruk av fluorokromer ble mulig i 19301<\/sup><\/a>I dag finnes det mange kombinasjoner av fluorokromer som kan brukes til \u00e5 farge proteiner, organeller og strukturer i celler og vev.<\/p>\n\n\n\n Fluorokromer (eller fluoroforer)<\/strong> er molekyler som n\u00e5r de eksiteres med en bestemt b\u00f8lgelengde, sender ut lys med en definert b\u00f8lgelengde som fanges opp av linsene i et mikroskop og omdannes til et faktisk bilde.<\/p>\n\n\n\n Kombinasjonen av fluorescens, linser og kameraer gj\u00f8r det mulig \u00e5 avbilde prosesser inne i celler fra mange ulike vinkler og aspekter.<\/p>\n\n\n\n Ved hjelp av mikroskopet kan vi for eksempel se et st\u00f8rre bilde av et snitt av en musehjerne i et 2,5x- eller 4x-objektiv, og sm\u00e5 detaljer av det unders\u00f8kte aktincytoskjelettet i den samme pr\u00f8ven med et 63x-objektiv.<\/p>\n\n\n\n For \u00e5 muliggj\u00f8re disse analysene kan vi bruke antistoffer eller fargestoffer mot spesifikke proteiner i cellen eller vevet, og antistoffet er vanligvis utstyrt med en fluorofor.<\/p>\n\n\n\n Stokes' skift forklarer dette fenomenet: Fluoroforer mister vibrasjonsenergi i form av utsendt lys n\u00e5r de g\u00e5r fra en eksitert tilstand tilbake til grunntilstanden. Fluorescensmikroskoper gir lys til \u00e5 eksitere fluoroforen, og mottar det utsendte lyset. Det utsendte lyset kan fanges opp av en linse, behandles i et CCD-kamera og omdannes til et digitalt bilde.<\/p>\n\n\n\n Men la oss snakke om cellebildeopptak senere. N\u00e5 skal vi gi deg eksempler og tips til de viktigste trinnene f\u00f8r du tar bildet.<\/p>\n\n\n\n How do we choose and combine different types of dyes and antibodies, to see and understand relationships between organelles and proteins inside cells or tissues?<\/p>\n\n\n\n First, scientists need to determine which antibodies and dyes to use based on their research.<\/p>\n\n\n\n For eksempel, i denne artikkelen<\/a>Mendon\u00e7a fors\u00f8kte \u00e5 evaluere effektene og de potensielle risikoene ved kationiske faste lipidnanopartikler (cSLN) i rotter. Mange nanopartikler utvikles og studeres hvert \u00e5r, med sikte p\u00e5 \u00e5 forbedre tilf\u00f8rselen av legemidler eller gener for \u00e5 behandle mange sykdommer. Et av de interessante sp\u00f8rsm\u00e5lene i denne studien var om nanopartiklene var i stand til \u00e5 n\u00e5 hjernen ved \u00e5 krysse blod-hjerne-barrieren. Denne barrieren beskytter hjernen v\u00e5r mot sirkulerende giftstoffer eller patogener, og vanligvis er det ikke \u00f8nskelig at molekyler krysser barrieren. Men i dette spesielle tilfellet Mendon\u00e7a's<\/a> M\u00e5let var at nanopartiklene skulle krysse barrieren og n\u00e5 frem til hjernen for \u00e5 kunne levere legemidler eller gener i en fremtidig applikasjon.<\/p>\n\n\n\n For \u00e5 se om nanopartiklene var til stede i hjernens parenkym, brukte forfatterne en endotelcellemark\u00f8r for karene som heter RECA-1 (representert i r\u00f8dt), mens cellekjernene ble farget med et fargestoff som heter DAPI (4\u2032,6-diamidino-2-fenylindol), som er bl\u00e5tt. Vi kan ogs\u00e5 observere sm\u00e5 gr\u00f8nne prikker for nanopartiklene utenfor karene, noe som betyr at de n\u00e5dde inn i hjerneparenkymet.<\/p>\n\n\n\n Check out the infographic below with a representation image.<\/p>\n\n\n La oss forst\u00e5 hva antistoffet for RECA-1 (r\u00f8dt) gj\u00f8r.<\/p>\n\n\n\n These antibodies are designed to serve as specific probes, and they target a specific antigen (in our case, the protein RECA-1).<\/p>\n\n\n\n De kan merkes med en fluorofor eller gjenkjennes senere av et sekund\u00e6rt antistoff som er koblet til en fluorofor.<\/p>\n\n\n\n Derfor, etter at pr\u00f8ven er blitt tent med en lyskilde, det spesifikke proteinet du leter etter, gjenkjennes i pr\u00f8ven ved at det avgir lys med en bestemt b\u00f8lgelengde.<\/a>.<\/p>\n\n\n\n N\u00e5r det gjelder DAPI, er dette fargestoffet et motfargestoff for kjerner og nukleosomer, og det avgir bl\u00e5 fluorescens n\u00e5r det binder seg til AT-omr\u00e5der i DNA.<\/p>\n\n\n\n Hvordan utforme et panel for immunfluorescens? <\/strong><\/p>\n\n\n\n Begynn med disse trinnene:<\/strong><\/p>\n\n\n\n Sjekk til slutt et eksempel p\u00e5 et hypotetisk eksperiment der vi har Hoechst 33258 for nukleinsyrene og et prim\u00e6rt antistoff mot RECA-1 merket med et sekund\u00e6rt antistoff Alexa Fluor 647.<\/p>\n\n\n\n Ideelt sett ville vi brukt et mikroskop med en DAPI-kube (eksitasjon 377\/50 og emisjon 447\/60) og en CY5-kube (eksitasjon 628\/40 og emisjon 685\/40). All denne informasjonen har vi lagt inn p\u00e5 Visning av fluorescensspektre<\/a> og fikk spektrene for begge fargestoffene og b\u00e5ndbreddene for begge kubene (se spektret i infografikken over).<\/p>\n\n\n\n Dette hypotetiske essayet er et godt eksempel p\u00e5 at fluoroforenes spektre h\u00f8rer hjemme innenfor eksitasjons- og emisjonsfiltrene, noe som gj\u00f8r det mulig for forskeren \u00e5 fange opp pr\u00f8vene sine p\u00e5 best mulig m\u00e5te.<\/p>\n\n\n\n N\u00e5 er det p\u00e5 tide \u00e5 g\u00e5 til laboratoriet og sette alt i praksis!<\/p>\n\n\n\n Jeg h\u00e5per disse tipsene kan hjelpe deg med ditt neste laboratoriefors\u00f8k. Lykke til!<\/p>\n\n\n\n Referanser:<\/strong><\/p>\n\n\n\n En stor del av forskerens rutine er \u00e5 utforme og utf\u00f8re eksperimenter. Kombinasjonen av laboratorieteknikker vil gi svar p\u00e5 de fleste sp\u00f8rsm\u00e5l som forskerne stiller, og arbeidsflyten for \u00e5 foresl\u00e5 nye metoder avhenger av forskerens bakgrunn og erfaring. For biologer kan cellebilder si mye om hva som skjer med [...].<\/p>","protected":false},"author":18,"featured_media":12982,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":[],"categories":[66,959,958,28,38],"tags":[51,554,962],"yoast_head":"\n![\"Mind](\"https:\/\/mindthegraph.com\/blog\/wp-content\/uploads\/2021\/06\/preview-347880-7-788x1024.png\")
<\/a><\/figure><\/div>\n\n\n\n
\n