A fest\u00e9kek, antitestek \u00e9s fluoreszcens szond\u00e1k haszn\u00e1lata lehet\u0151v\u00e9 teszi a tud\u00f3sok sz\u00e1m\u00e1ra, hogy a mikroszk\u00f3pos sejtekben olyan k\u00e9peket l\u00e1ssanak, amelyek egy\u00e9bk\u00e9nt t\u00fal kicsik ahhoz, hogy l\u00e1that\u00f3ak, s\u0151t felfoghat\u00f3ak legyenek.<\/p>\n\n\n\n
Fluoreszcens mikroszk\u00f3pok<\/strong> \u00e9s a fluorokr\u00f3mok haszn\u00e1lata 1930-ban v\u00e1lt lehet\u0151v\u00e91<\/sup><\/a>, \u00e9s ma m\u00e1r a fluorokr\u00f3mok sz\u00e1mos kombin\u00e1ci\u00f3ja lehets\u00e9ges a feh\u00e9rj\u00e9k, organellumok \u00e9s a sejteken \u00e9s sz\u00f6veteken bel\u00fcli strukt\u00far\u00e1k fest\u00e9s\u00e9re.<\/p>\n\n\n\n Fluorokr\u00f3mok (vagy fluoroforok)<\/strong> olyan molekul\u00e1k, amelyek egy meghat\u00e1rozott hull\u00e1mhossz\u00fas\u00e1g\u00fa f\u00e9nnyel gerjesztve meghat\u00e1rozott hull\u00e1mhossz\u00fas\u00e1g\u00fa f\u00e9nyt bocs\u00e1tanak ki, amelyet a mikroszk\u00f3p lencs\u00e9i befognak, \u00e9s t\u00e9nyleges k\u00e9pp\u00e9 alak\u00edtanak.<\/p>\n\n\n\n A fluoreszcencia, a lencs\u00e9k \u00e9s a kamer\u00e1k kombin\u00e1ci\u00f3ja lehet\u0151v\u00e9 teszi, hogy a sejtekben zajl\u00f3 folyamatokr\u00f3l sz\u00e1mos k\u00fcl\u00f6nb\u00f6z\u0151 n\u00e9zetben \u00e9s aspektusb\u00f3l k\u00e9pet k\u00e9sz\u00edts\u00fcnk.<\/p>\n\n\n\n A mikroszk\u00f3p seg\u00edts\u00e9g\u00e9vel p\u00e9ld\u00e1ul 2,5x vagy 4x objekt\u00edvvel sz\u00e9lesebb k\u00e9pet kaphatunk egy eg\u00e9r agyszeletr\u0151l, 63x objekt\u00edvvel pedig ugyanabban a mint\u00e1ban a vizsg\u00e1lt aktin citoszkeleton apr\u00f3 r\u00e9szleteir\u0151l.<\/p>\n\n\n\n E vizsg\u00e1latok elv\u00e9gz\u00e9s\u00e9hez a sejtben vagy sz\u00f6vetben jelen l\u00e9v\u0151 specifikus feh\u00e9rj\u00e9kkel szemben antitesteket vagy fest\u00e9keket haszn\u00e1lhatunk, \u00e9s az antitest \u00e1ltal\u00e1ban fluorof\u00f3rral van ell\u00e1tva.<\/p>\n\n\n\n A Stokes-f\u00e9le eltol\u00f3d\u00e1s magyar\u00e1zza ezt a jelens\u00e9get: a fluorof\u00f3rok rezg\u00e9si energi\u00e1t vesz\u00edtenek a kibocs\u00e1tott f\u00e9ny form\u00e1j\u00e1ban, amikor a gerjesztett \u00e1llapotb\u00f3l visszav\u00e1ltoznak az alap\u00e1llapotba. A fluoreszcens mikroszk\u00f3pok biztos\u00edtj\u00e1k a fluorof\u00f3r gerjeszt\u00e9s\u00e9hez sz\u00fcks\u00e9ges f\u00e9nyt, \u00e9s fogadj\u00e1k a kibocs\u00e1tott f\u00e9nyt. A kibocs\u00e1tott f\u00e9nyt egy lencs\u00e9vel r\u00f6gz\u00edthetj\u00fck, egy CCD-kamer\u00e1ban feldolgozhatjuk, \u00e9s digit\u00e1lis k\u00e9pp\u00e9 alak\u00edthatjuk.<\/p>\n\n\n\n De a cellak\u00e9pek felv\u00e9tel\u00e9r\u0151l majd k\u00e9s\u0151bb besz\u00e9l\u00fcnk. Most a k\u00e9pfelv\u00e9telt megel\u0151z\u0151 f\u0151bb l\u00e9p\u00e9sekhez kell p\u00e9ld\u00e1kat \u00e9s tippeket bemutatnunk.<\/p>\n\n\n\n Hogyan v\u00e1lasszuk ki \u00e9s kombin\u00e1ljuk a k\u00fcl\u00f6nb\u00f6z\u0151 t\u00edpus\u00fa fest\u00e9keket \u00e9s antitesteket, hogy l\u00e1ssuk \u00e9s meg\u00e9rts\u00fck a sejteken vagy sz\u00f6veteken bel\u00fcli szervsejtek \u00e9s feh\u00e9rj\u00e9k k\u00f6z\u00f6tti kapcsolatokat?<\/p>\n\n\n\n El\u0151sz\u00f6r is a tud\u00f3soknak meg kell hat\u00e1rozniuk, hogy a kutat\u00e1saik alapj\u00e1n milyen antitesteket \u00e9s fest\u00e9keket haszn\u00e1ljanak.<\/p>\n\n\n\n P\u00e9ld\u00e1ul, ebben a cikkben<\/a>, Mendon\u00e7a a kationos szil\u00e1rd lipid nanor\u00e9szecsk\u00e9k (cSLN) hat\u00e1sait \u00e9s lehets\u00e9ges kock\u00e1zatait pr\u00f3b\u00e1lta felm\u00e9rni patk\u00e1nyokon. \u00c9vente sz\u00e1mos nanor\u00e9szecsk\u00e9t fejlesztenek ki \u00e9s tanulm\u00e1nyoznak, amelyek c\u00e9lja a gy\u00f3gyszerek vagy g\u00e9nek sz\u00e1ll\u00edt\u00e1sa sz\u00e1mos betegs\u00e9g kezel\u00e9s\u00e9re. A vizsg\u00e1lat egyik \u00e9rdekes k\u00e9rd\u00e9se az volt, hogy a nanor\u00e9szecsk\u00e9k k\u00e9pesek-e a v\u00e9r-agy g\u00e1ton \u00e1thatolva eljutni az agyba. Ez a g\u00e1t v\u00e9di agyunkat a kering\u0151 m\u00e9reganyagokt\u00f3l vagy k\u00f3rokoz\u00f3kt\u00f3l, \u00e9s \u00e1ltal\u00e1ban nem k\u00edv\u00e1natos, hogy a molekul\u00e1k \u00e1tl\u00e9pj\u00e9k a g\u00e1tat. De ebben a k\u00fcl\u00f6nleges esetben, Mendon\u00e7a<\/a> A c\u00e9l az volt, hogy a nanor\u00e9szecsk\u00e9k \u00e1tjussanak a g\u00e1ton, \u00e9s eljussanak az agyba, hogy egy k\u00e9s\u0151bbi alkalmaz\u00e1s sor\u00e1n gy\u00f3gyszereket vagy g\u00e9neket juttassanak be.<\/p>\n\n\n\n Meg akart\u00e1k n\u00e9zni, hogy a nanor\u00e9szecsk\u00e9k jelen vannak-e az agyparenchim\u00e1ban, ez\u00e9rt a szerz\u0151k az ereket jel\u00f6l\u0151 RECA-1 nev\u0171 endot\u00e9lsejt-markert haszn\u00e1lt\u00e1k (piros sz\u00ednnel \u00e1br\u00e1zolva), m\u00edg a sejtmagokat a DAPI (4\u2032,6-diamidino-2-fenilindol) nev\u0171 fest\u00e9kkel festett\u00e9k meg, amely k\u00e9k sz\u00edn\u0171. Az ereken k\u00edv\u00fcl kis z\u00f6ld p\u00f6tty\u00f6ket is megfigyelhet\u00fcnk a nanor\u00e9szecsk\u00e9kre, ami azt jelenti, hogy el\u00e9rt\u00e9k az agyi parenchim\u00e1t.<\/p>\n\n\n\n Tekintse meg az al\u00e1bbi infografik\u00e1t egy reprezent\u00e1ci\u00f3s k\u00e9ppel.<\/p>\n\n\n \u00c9rts\u00fck meg, mit csin\u00e1l a RECA-1 antitest (piros).<\/p>\n\n\n\n Ezeket az antitesteket \u00fagy tervezt\u00e9k, hogy specifikus szondak\u00e9nt szolg\u00e1ljanak, \u00e9s egy adott antig\u00e9nt (eset\u00fcnkben a RECA-1 feh\u00e9rj\u00e9t) c\u00e9lozz\u00e1k meg.<\/p>\n\n\n\n Ezeket fluorof\u00f3rral lehet jel\u00f6lni, vagy k\u00e9s\u0151bb egy fluorof\u00f3rhoz k\u00f6t\u00f6tt m\u00e1sodlagos ellenanyaggal lehet felismerni.<\/p>\n\n\n\n Ez\u00e9rt a minta f\u00e9nyforr\u00e1ssal t\u00f6rt\u00e9n\u0151 gerjeszt\u00e9se ut\u00e1n, a keresett feh\u00e9rje a mint\u00e1ban egy adott hull\u00e1mhossz\u00fas\u00e1g\u00fa f\u00e9ny kibocs\u00e1t\u00e1sa alapj\u00e1n lesz felismerhet\u0151.<\/a>.<\/p>\n\n\n\n A DAPI eset\u00e9ben ez a fest\u00e9k a sejtmagok \u00e9s nukleosz\u00f3m\u00e1k ellenfest\u00e9ke, \u00e9s a DNS AT r\u00e9gi\u00f3ihoz k\u00f6t\u0151dve k\u00e9k fluoreszcenci\u00e1t bocs\u00e1t ki.<\/p>\n\n\n\n Hogyan tervezz\u00fcnk panelt immunfluoreszcenci\u00e1hoz? <\/strong><\/p>\n\n\n\n Kezdje a k\u00f6vetkez\u0151 l\u00e9p\u00e9sekkel:<\/strong><\/p>\n\n\n\n V\u00e9g\u00fcl n\u00e9zzen meg egy p\u00e9ld\u00e1t egy hipotetikus k\u00eds\u00e9rletre, ahol a nukleinsavakhoz Hoechst 33258, a RECA-1 elleni els\u0151dleges ellenanyagot pedig Alexa Fluor 647-es m\u00e1sodlagos ellenanyaggal jel\u00f6lt\u00fck.<\/p>\n\n\n\n Ide\u00e1lis esetben olyan mikroszk\u00f3pot haszn\u00e1ln\u00e1nk, amely DAPI kock\u00e1val (gerjeszt\u00e9s 377\/50 \u00e9s emisszi\u00f3 447\/60) \u00e9s CY5 kock\u00e1val (gerjeszt\u00e9s 628\/40 \u00e9s emisszi\u00f3 685\/40) \u00e1ll rendelkez\u00e9sre. Mindezeket az inform\u00e1ci\u00f3kat beillesztett\u00fck a Fluoreszcencia spektrum megtekint\u0151<\/a> \u00e9s megkaptuk mindk\u00e9t sz\u00ednez\u00e9k spektrum\u00e1t, valamint mindk\u00e9t kocka s\u00e1vsz\u00e9less\u00e9g\u00e9t (n\u00e9zze meg a spektrumot a fenti infografik\u00e1n).<\/p>\n\n\n\n Ez a hipotetikus essz\u00e9 j\u00f3 p\u00e9lda arra, hogy a fluorof\u00f3rok spektrumai a gerjeszt\u00e9si \u00e9s emisszi\u00f3s sz\u0171r\u0151k\u00f6n bel\u00fclre tartoznak, lehet\u0151v\u00e9 t\u00e9ve a kutat\u00f3 sz\u00e1m\u00e1ra, hogy a lehet\u0151 legjobb m\u00f3don r\u00f6gz\u00edtse a mint\u00e1it.<\/p>\n\n\n\n Most itt az ideje, hogy a laborba menj, \u00e9s mindent a gyakorlatba \u00fcltess!<\/p>\n\n\n\n Rem\u00e9lem, ezek a tippek seg\u00edtenek a k\u00f6vetkez\u0151 laborat\u00f3riumi k\u00eds\u00e9rletedben. Sok sikert!<\/p>\n\n\n\n Hivatkoz\u00e1sok:<\/strong><\/p>\n\n\n\n A tud\u00f3sok rutinj\u00e1nak nagy r\u00e9sze a k\u00eds\u00e9rletek megtervez\u00e9se \u00e9s elv\u00e9gz\u00e9se. A laborat\u00f3riumi technik\u00e1k kombin\u00e1ci\u00f3ja a tud\u00f3sok \u00e1ltal felvetett k\u00e9rd\u00e9sek t\u00f6bbs\u00e9g\u00e9re v\u00e1laszt ad, az \u00faj m\u00f3dszereket javasolni k\u00e9pes munkafolyamat pedig a tud\u00f3s h\u00e1tter\u00e9t\u0151l \u00e9s tapasztalat\u00e1t\u00f3l f\u00fcgg. A biol\u00f3gusok sz\u00e1m\u00e1ra a sejtk\u00e9pek sokat el\u00e1rulhatnak arr\u00f3l, hogy mi t\u00f6rt\u00e9nik a [...]<\/p>","protected":false},"author":18,"featured_media":12982,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":[],"categories":[66,959,958,28,38],"tags":[51,554,962],"yoast_head":"\n![\"Mind](\"https:\/\/mindthegraph.com\/blog\/wp-content\/uploads\/2021\/06\/preview-347880-7-788x1024.png\")
<\/a><\/figure><\/div>\n\n\n\n
\n