El uso de tintes, anticuerpos y sondas fluorescentes permite a los cient\u00edficos ver en las c\u00e9lulas del microscopio im\u00e1genes de lo que de otro modo ser\u00eda demasiado peque\u00f1o para ser visto e incluso comprendido.<\/p>\n\n\n\n
Microscopios de fluorescencia<\/strong> y el uso de fluorocromos fue posible en 19301<\/sup><\/a>Hoy en d\u00eda es posible realizar muchas combinaciones de fluorocromos para te\u00f1ir prote\u00ednas, org\u00e1nulos y estructuras dentro de las c\u00e9lulas y los tejidos.<\/p>\n\n\n\n Fluorocromos (o fluor\u00f3foros)<\/strong> son mol\u00e9culas que, al ser excitadas con una longitud de onda espec\u00edfica, emiten luz de una longitud de onda definida que ser\u00e1 captada por las lentes de un microscopio, y transformada en una imagen real.<\/p>\n\n\n\n La combinaci\u00f3n de fluorescencia, lentes y c\u00e1maras nos permite tomar una imagen de los procesos en el interior de las c\u00e9lulas en muchas vistas y aspectos diferentes.<\/p>\n\n\n\n Por ejemplo, utilizando el microscopio, tenemos una visi\u00f3n m\u00e1s amplia de un corte de cerebro de rat\u00f3n en un objetivo de 2,5x o 4x, y peque\u00f1os detalles del citoesqueleto de actina sondeado en la misma muestra utilizando un objetivo de 63x.<\/p>\n\n\n\n Para realizar estos ensayos, podemos utilizar anticuerpos o colorantes contra prote\u00ednas espec\u00edficas presentes en la c\u00e9lula o el tejido, y el anticuerpo suele llevar un fluor\u00f3foro.<\/p>\n\n\n\n El desplazamiento de Stokes explica este fen\u00f3meno: los fluor\u00f3foros pierden energ\u00eda vibracional en forma de luz emitida cuando cambian de un estado excitado al estado b\u00e1sico. Los microscopios de fluorescencia proporcionan la luz para excitar el fluor\u00f3foro y reciben su luz emitida. La luz emitida puede ser captada por una lente, procesada en una c\u00e1mara CCD y transformada en una imagen digital.<\/p>\n\n\n\n Pero hablaremos de la adquisici\u00f3n de im\u00e1genes de c\u00e9lulas m\u00e1s adelante. Ahora, debemos presentarle ejemplos y consejos para los principales pasos antes de adquirir su imagen.<\/p>\n\n\n\n \u00bfC\u00f3mo elegimos y combinamos diferentes tipos de tintes y anticuerpos para ver y comprender las relaciones entre los org\u00e1nulos y las prote\u00ednas del interior de las c\u00e9lulas o los tejidos?<\/p>\n\n\n\n En primer lugar, los cient\u00edficos tienen que determinar qu\u00e9 anticuerpos y tintes utilizar en funci\u00f3n de su investigaci\u00f3n.<\/p>\n\n\n\n Por ejemplo, en este art\u00edculo<\/a>El objetivo de Mendon\u00e7a era evaluar los efectos y los posibles riesgos de las nanopart\u00edculas lip\u00eddicas s\u00f3lidas cati\u00f3nicas (cSLN) en ratas. Cada a\u00f1o se desarrollan y estudian muchas nanopart\u00edculas con el objetivo de mejorar la administraci\u00f3n de f\u00e1rmacos o genes para tratar muchas enfermedades. Una de las cuestiones interesantes de este estudio era saber si las nanopart\u00edculas eran capaces de llegar al cerebro atravesando la barrera hematoencef\u00e1lica. Esta barrera protege a nuestro cerebro de las toxinas o pat\u00f3genos que circulan, y normalmente no es deseable que las mol\u00e9culas crucen la barrera. Pero en este caso concreto, Mendon\u00e7a's<\/a> El objetivo era que las nanopart\u00edculas atravesaran la barrera y llegaran al cerebro, para administrar f\u00e1rmacos o genes en una futura aplicaci\u00f3n.<\/p>\n\n\n\n Dispuestos a ver si las nanopart\u00edculas estaban presentes en el par\u00e9nquima cerebral, los autores utilizaron un marcador de c\u00e9lulas endoteliales para los vasos llamado RECA-1 (representado en rojo), mientras que los n\u00facleos celulares se ti\u00f1eron con un colorante llamado DAPI (4\u2032,6-diamidino-2-fenilindol) que es azul. Tambi\u00e9n podemos observar peque\u00f1os puntos verdes para las nanopart\u00edculas fuera de los vasos, lo que significa que llegaron al par\u00e9nquima cerebral.<\/p>\n\n\n\n Consulte la infograf\u00eda siguiente con una imagen de representaci\u00f3n.<\/p>\n\n\n Entendamos lo que hace el anticuerpo para RECA-1 (rojo).<\/p>\n\n\n\n Estos anticuerpos est\u00e1n dise\u00f1ados para servir como sondas espec\u00edficas, y se dirigen a un ant\u00edgeno concreto (en nuestro caso, la prote\u00edna RECA-1).<\/p>\n\n\n\n Pueden ser marcados con un fluor\u00f3foro o reconocidos posteriormente por un anticuerpo secundario unido a un fluor\u00f3foro.<\/p>\n\n\n\n Por lo tanto, despu\u00e9s de excitar la muestra con una fuente de luz, la prote\u00edna espec\u00edfica que est\u00e1 buscando ser\u00e1 reconocida en su muestra por la emisi\u00f3n de luz en una longitud de onda espec\u00edfica<\/a>.<\/p>\n\n\n\n En el caso del DAPI, este colorante es un contratinci\u00f3n de n\u00facleos y nucleosomas, y emite fluorescencia azul cuando se une a las regiones AT del ADN.<\/p>\n\n\n\n \u00bfC\u00f3mo dise\u00f1ar un panel de inmunofluorescencia? <\/strong><\/p>\n\n\n\n Empieza con estos pasos:<\/strong><\/p>\n\n\n\n Por \u00faltimo, revise un ejemplo para un experimento hipot\u00e9tico donde tenemos Hoechst 33258 para los \u00e1cidos nucleicos, y un anticuerpo primario contra RECA-1 marcado con un anticuerpo secundario Alexa Fluor 647.<\/p>\n\n\n\n Lo ideal ser\u00eda utilizar un microscopio disponible con un cubo de DAPI (excitaci\u00f3n 377\/50 y emisi\u00f3n 447\/60), y un cubo de CY5 (excitaci\u00f3n 628\/40 y emisi\u00f3n 685\/40). Toda esta informaci\u00f3n la insertamos en Visor de espectros de fluorescencia<\/a> y obtuvimos los espectros de ambos tintes, as\u00ed como los anchos de banda de ambos cubos (mira el espectro en la infograf\u00eda de arriba).<\/p>\n\n\n\n Este ensayo hipot\u00e9tico es un buen ejemplo en el que los espectros de los fluor\u00f3foros se encuentran dentro de los filtros de excitaci\u00f3n y emisi\u00f3n, lo que permite al investigador captar sus muestras de la mejor manera posible.<\/p>\n\n\n\n Ahora, \u00a1es el momento de ir al laboratorio y poner todo en pr\u00e1ctica!<\/p>\n\n\n\n Espero que estos consejos te ayuden en tu pr\u00f3ximo experimento de laboratorio. Buena suerte.<\/p>\n\n\n\n Referencias:<\/strong><\/p>\n\n\n\n Una gran parte de la rutina del cient\u00edfico consiste en dise\u00f1ar y realizar experimentos. La combinaci\u00f3n de t\u00e9cnicas de laboratorio responder\u00e1 a la mayor\u00eda de las preguntas propuestas por los cient\u00edficos, y el flujo de trabajo para sugerir nuevos m\u00e9todos depende de la formaci\u00f3n y la experiencia del cient\u00edfico. Para los bi\u00f3logos, las im\u00e1genes de las c\u00e9lulas pueden decir mucho acerca de lo que [...]<\/p>","protected":false},"author":18,"featured_media":12982,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":[],"categories":[66,959,958,28,38],"tags":[51,554,962],"yoast_head":"\n![\"Mind](\"https:\/\/mindthegraph.com\/blog\/wp-content\/uploads\/2021\/06\/preview-347880-7-788x1024.png\")
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